Validação de método de separação e análise de vesículas extracelulares humanas oriundas de camundongos imunodeficientes com carcinoma de células renais
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Data
2022-12-15
Tipo de documento
Artigo Científico
Título da Revista
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Título de Volume
Área do conhecimento
Ciências da Saúde
Modalidade de acesso
Acesso fechado
Editora
Autores
Vittoria Riva Zampetti
Orientador
Tiago Góss dos Santos
Coorientador
Tatiana Shirota Satake
Resumo
O Carcinoma de célula renal (CCR) representa cerca de 90% de todas as malignidades renais e suas causas até o momento não estão estabelecidas. Por outro lado, sabe-se que as vesículas extracelulares (VEs) são capazes de mediar processos como coagulação, resposta imune e o estabelecimento de nichos pré-metastáticos têm atraído atenção para sua importância como marcadores de resposta ao tratamento. Nesse contexto, esse estudo teve como objetivo validar os biomarcadores tumorais renais em linhagens celulares e em modelos in vivo (Patient Derived Xenografts ou PDX) e o protocolo de isolamento e análise de VEs. Para isso, fragmentos tumorais foram obtidos em cirurgia de pacientes com carcinoma de célula renal para o estabelecimento de culturas primárias. Após a obtenção das culturas, foi realizado o isolamento, a quantificação e caracterização de VEs e, a partir disso, as proteínas das VEs foram extraídas e analisadas. Foi possível atingir a imortalização da linhagem CCR26 de carcinoma de célula renal humano a partir da cultura primária, sendo que as VEs desta linhagem apresentaram tamanhos na faixa de 100 e 300 nm. As linhagens comerciais CaKi e ACHN apresentaram diferentes perfis de secreção de VEs, em tamanhos variados de 100 a 500 nm. Foram totalizadas 33,23µg de proteínas na linhagem CCR26, 19,64 µg na linhagem CaKi e 29,46 µg na linhagem ACHN, porém, ainda não foi estabelecida a quantidade mínima de VEs para a espectrometria de massa. Contudo, o protocolo para isolamento das VEs das respectivas linhagens celulares foi estabelecido, sendo que as VEs da linhagem CCR26 mostrou-se diferente das demais a partir de seu tamanho reduzido.
Palavras-chave
Células de carcinoma renal (CCR), Patient-Derived-Xenografts (PDX), Vesículas extracelulares